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酶聯免疫測定技術（ELISA）的放大系統
發(fā)布時間： 2010-01-31 點擊次數： 2700次酶聯免疫測定技術（ELISA）的放大系統酶免疫測定自20世紀70年代初創(chuàng)立以來，由于其具有特異、靈敏、簡便、快速的特點，現已在生物醫(yī)學研究領域及臨床疾病的診療中得到了廣泛的應用，相對于放射免疫測定（RIA）技術來說，EIA還有試劑半衰期長，對環(huán)境污染小，試驗廢物易于處理等優(yōu)點，但測定敏感性一般較RIA低，于是，為提高EIA的測定敏感性，出現了眾多的EIA測定放大系統，使EIA的測定敏感性趕上甚或超過了RIA。建立正IA測定放大系統的一般原則EIA本身是以酶[辣根過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶（AP）等]作標記物的，因此，EIA的測定放大始終是圍繞著標記酶來作文章的，不外乎三種可能的方式：①增加標記酶的量；②非顯色底物的應用；③附加一個受標記酶催化的反應系統。一、增加標記酶的量通過生物素／親合素—酶或酶／抗酶復合物的間接方法，可以增加ELISA測定中zui后所測定的標記酶的量。這種方法雖在一定程度上由于標記酶的聚集增加了EIA的測定敏感性，但同時有增加非特異的背景顯色的可能。二、非顯色底物的應用從酶的反應底物著手，使用具有高測定敏感性的非顯色底物如熒光素或發(fā)光物，從而提高EIA的測定敏感性，這種方法的優(yōu)點是不需額外的步驟及試劑制備，缺點是需要特殊的測定儀器。三、附加一個受標記酶催化的反應系統原始標記酶催化附加一個反應系統，如酶底物反應循環(huán)或酶級聯反應，從而達到反應放大的目的。這種由數個催化反應的耦聯而構建的放大系統，是酶放大的根本之所在，敏感性的提高來源于真正的信號放大，而不是簡單地將一個分子轉變?yōu)楦嗟囊子跍y定的分子。一個適用的酶放大系統的選擇除了要考慮生化因素外，zui為重要的是酶及其底物的穩(wěn)定性，并要易于獲得，因其對試驗的準確性和重復性有較大的影響。
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